医美产业笔记导读：

在玻尿酸市场不断扩张的今天，中国企业的市场占有率已达到了全球第一。随着应用市场的不断拓展，对玻尿酸原料厂家也提出了更高要求。近日，在医美产业笔记主办的“轻医美 见未来·2022中国轻医美大会”上，众山生物总经理张建勇以《内毒素与高品质透明质酸》为主题带来干货分享，以下为精彩内容：

首先，我们要说一款产品好，一定要了解它好在哪里，它的核心原料为什么好。从内毒素发展史看，人类对内毒素发展的认识是从19世纪开始的，从对腐烂生物的研究过渡到对微生物的研究，经历了以下4个科学家研究人类内毒素的关键节点。

一、什么是内毒素

到现在，我们的研究已经对什么是内毒素有了明晰的认知：内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁的一种成分，叫做脂多糖，也就是图片上细胞外膜上段的结构。脂多糖的结构，上面的部分是多糖的链状结构，底下是脂类，因此被称为脂多糖。

虽然内毒素紧密地嵌入细胞壁中，但不是绝对稳定的，在细胞生长、分裂或死亡的时候，脂多糖会脱离出来，产生毒素，所以叫细菌内毒素。尤其是革兰氏阴性菌死亡的时候，发生的作用比较大，对人体、环境及它的载体产生危害，所以我们简单可以理解为 “细菌的尸体”，这是一种俗称。

二、内毒素的作用原理及危害

内毒素的作用原理：主要由革兰氏阴性菌、部分球菌、螺旋体、立克次氏体、支原体来释放内毒素，但它并不直接作用于人体细胞，而是通过激活单核巨噬细胞、多形核白细胞，刺激产生细胞因子。这些细胞因子介导或刺激人体产生前列腺素、血小板激活因子、一氧化氮等炎症介质，这些介质在人体表现出来的毒副作用，包括炎性反应，最基础是发热反应，严重的就有死亡。

内毒素的危害：主要是发热，还有严重的一些脓毒症、血管舒缩机能紊乱、糖代谢异常、弥漫性血管内凝血等，这些主要出现药剂里，尤其是注射剂对人体的危害更加明显。对于从事医美或化妆品行业的，内毒素的危害也带来实实在在相关的问题，当内毒素进入血液的时候，会引起毒副反应和介导炎性因子，产生红肿、过敏、荨麻疹、硬块等等，我们很多客户经常碰到产品有过敏率的问题。

图3是人正常皮肤的成纤维细胞结构的样子，右边是因为刺激产生瘢痕的细胞，左边是融合内毒素后，产生更加明显瘢痕一样的细胞。从研究可以看出，内毒素很有可能跟细胞瘢痕产生刺激直接相关。

内毒素跟热原的关系是密不可分的，所有能引起热原反应的物质都叫热原，内毒素是引起热原反应最重要的因素，但是这两个概念之间不是绝对的等号，一般我们可以理解为细菌内毒素本身就是热原，但是热原不等于细菌内毒素，目前很多药物有热原反应，特别是注射液。

三、内毒素的法规要求

我们列举了韩国药典、欧洲药典以及YYT对内毒素的指标要求，欧洲和韩国药典的内毒素要求，实际上是等同的。如果大家仔细看，实际上分两个档次：产品不同的应用，风险不一样，内毒素的指标也不一样，因此有0.5EU/mg，也有0.05EU/mg，要求低的可以用低风险的，比如说滴眼液；要求高的可以选高标准的，如眼科手术、真皮下注射等就要执行高标准的，我们YYT则是0.05的，这是法规要求。

当然法规是基本要求，我们公司则是以法规最高标准0.05EU/mg作为产品内控的最基本，也是最低的要求。

四、内毒素的检测方法

热原和内毒素高度相关，对于产品来说，我们控制一个就够了。有一些产品做热原，有一些产品做内毒素。给小兔子注射进我们的产品后，它产生热原反应后会发烧体温上升，我们也通过测量它体温的变化情况来判定产品是否符合标准。

更多用内毒素的控制方法来进行检测，基本上分为两类：一个是鲎试剂，通过定量或者半定量的鲎试剂动态检测法；另外一类是光度法，利用光度法仪器测定它的吸收反应，内毒素在一定试剂条件下，会显示出变色或者变浑浊，我们通过测定透光率来判定我们的内毒素含量水平。

最权威最标准的方法就是鲎试剂，这是远古一个特别的海洋生物，4-5亿年前就有的，一种稀有的活化石。由于它在医药行业里特殊的蓝色血液，能够分离出来见了内毒素就会发生凝固反应的特殊物质，因此得到了科学方面的广泛应用。但这个生物已经成为二级保护动物，资源越来越少，因此使用上也会受到限制。同时还有一些更先进的方法，如荧光检测试剂盒等，但是这些方法现在还不是检测标准的最好方法。

我们怎么控制内毒素在保险的水平？如果有了，怎么去除？

首先是耐热，普通的灭菌方式是去不了内毒素的，它具有滤过性、吸附性、水溶性、不挥发性、不耐强酸、强碱、强氧化剂等性质，我们要根据它的性质，研究生产和去除方法。产品生产过程中，或多或少会有内毒素的，那怎么去除？可以通过高温、酸碱、吸附、蒸馏等方法。

第一个高温法，通过180度或200度的干热、干烤两个小时，越高温越能把热毒素杀死；

第二个是酸碱法，在酸碱性条件下发生反应，这种条件下可以得到不同的严格分子量，对内毒素消除也有价值；

第三个吸附法，最常见用的活性炭，活性炭在制药领域是普遍应用的，是用于去除内毒素很重要的一个物质；

第四个蒸馏法，我们在生产中会用到水，纯化水、注射用水，这个工艺就要用蒸馏法制作水，这个水的内毒素会得到比较好的控制；

第五个反渗透法，我们生产中用的各种各样的水，大部分是反渗透能力，后面是活性炭吸附和高温的方法。

五、众山生物高品质透明质酸钠

众山生物在国内是比较领先，有一定实力的医药级透明质酸钠供应商。第一个优势就是合规，从2005年创立，到2008年投入商业化生产就以药厂的定义，以原料药物的管理来设计公司的质量体系和生产线。在原材料经营领域，众山生物是中国第二家合规注册GMP证书、CEP证书欧洲药典适应性证的。

众山生物针对欧洲药典标准，以组织工程医疗器械产品透明质酸钠YY/T 1571-2017行业标准为依据，推出了内控标准更为严格的系列产品：MEDIHYA® I、MEDIHYA® M和MEDIHYA® S，可广泛应用于Ⅱ、Ⅲ类医疗器械。

众山生物的无菌HA车间，是中国第一条无菌HA生产线，经验证稳定的工艺技术，确保杂质核酸、内毒素水平分别为处于行业领先地位。注射级产品符合检测无菌要求。

至于为什么要做无菌的生产线？我们透明质酸产品是发酵来的，它有两个重要的性质，一个是热不太稳定，比较敏感。当温度比较高的时候，分子量是下降的，注射进去后维持的时间不长，容易被降解；另一个特性是黏，高分子物质做成产品的时候黏度比较高。

因为透明质酸产品要注射到人体内部，要求是无菌的，所以后面生产商做后续的产品首先要做就是灭菌。一种办法是高温灭菌，但产品又有着热不稳定的特性，如果是一款非交联产品在灭菌前后，它的黏度、弹性、维持时间等方面就是个很大挑战；另一个办法，就是除菌过滤，做出一个无菌产品。但我们这个产品的黏度非常高，用普通无菌过滤，很难做出无菌产品，这是一个需求和现实，也是目前在国内没有无菌产品的原因。

我们现有的注射型产品是用于医疗器械最高端的产品，用无菌检验的方法是合格的，也是目前在做的市场上最好的产品。为了解决这种后端的需求，我们投入了非常多的资金、人力、物力，来设计研发了这一套众山生物HA无菌生产线，除了现有合格的水平基础上，希望还能满足大家更多的需求。感谢大家对我们公司的认可，希望能继续带来高质量的产品，和大家有更多的合作。

文章来源：医与美产业笔记

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